https://hdl.handle.net/11185/13 2026-10-11T05:22:19Z https://hdl.handle.net/11185/9008 Utilización del 5-fluorouracilo para optimizar un candidato vacunal con elevada capacidad protectiva contra Trypanosoma cruzi en diferentes modelos murinos Borgna, Eliana La enfermedad de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, sigue siendo un problema de salud pública global, cuyo control se ve limitado por la ausencia de una vacuna efectiva debido a la complejidad del parásito y su capacidad de modular la respuesta inmune. Esta tesis abordó la vacunación desde una perspectiva integral, considerando tanto los mecanismos efectores como regulatorios. Se evaluó un candidato vacunal basado en una fracción de trans-sialidasa (TSf) formulada con ISPA, combinado con la depleción transitoria de células supresoras de origen mieloide (MDSCs) mediante 5-fluorouracilo (5FU). Se optimizó un esquema de doble administración de 5FU que permitió controlar la expansión de células CD11b⁺Gr-1⁺ durante la inmunización. Este protocolo mejoró la respuesta celular y aumentó la protección frente a infecciones letales en modelos murinos. Además, mostró eficacia en distintos modelos experimentales y capacidad de inducir memoria inmunológica. A nivel de mecanismos, se observó un aumento de linfocitos T CD4⁺ y CD8⁺, incluyendo poblaciones de memoria, y de células dendríticas funcionales. También se desarrolló una estrategia de monitoreo en sangre periférica para evaluar correlatos de protección. En conjunto, los resultados demuestran que la modulación de MDSCs potencia la eficacia vacunal, resaltando la importancia de integrar componentes regulatorios en el diseño de vacunas contra patógenos complejos.; Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, remains a global public health problem, whose control is hindered by the lack of an effective vaccine due to the parasite’s biological complexity and its ability to modulate the host immune response. This thesis addressed vaccination from an integrated perspective, considering both effector and regulatory immune mechanisms. A vaccine candidate based on a trans-sialidase fragment (TSf) formulated with ISPA was evaluated, combined with the transient depletion of myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) using 5-fluorouracil (5FU). A double 5FU administration scheme was optimized, allowing control of CD11b⁺Gr-1⁺ cell expansion during immunization. This protocol improved cellular immune responses and enhanced protection against lethal infections in murine models without affecting the humoral response. Moreover, it proved effective across different experimental settings and was capable of inducing immunological memory. At the mechanistic level, an increase in CD4⁺ and CD8⁺ T lymphocytes, including memory populations, as well as functional dendritic cells, was observed. In addition, a peripheral blood monitoring strategy was developed to assess correlates of protection. Overall, these results demonstrate that modulation of MDSCs enhances vaccine efficacy, highlighting the importance of integrating regulatory components into the design of vaccines against complex pathogens. Fil: Borgna, Eliana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. 2026-08-25T00:00:00Z https://hdl.handle.net/11185/8976 Impacto de la exposición a xenoestrógenos sobre las poblaciones de células germinales Galliani, Valentina La exposición a disruptores endocrinos (DE), como el filtro UV Benzofenona-3 (BP3) y el Bisfenol A (BPA), es ubicua debido a su presencia en productos de uso cotidiano y representa una amenaza para la salud reproductiva femenina. La tesis evaluó el impacto de dosis relevantes de BP3, BPA y su mezcla durante períodos críticos del desarrollo sobre la capacidad reproductiva a largo plazo. Se integraron modelos in vivo de exposición prenatal y perinatal, considerando la multiparidad como factor de susceptibilidad diferencial, análisis proteómico y modelos de ovulación in vitro mediante el cultivo de folículos aislados. La exposición dérmica perinatal a BP3 no alteró los parámetros gestacionales maternos, pero produjo subfertilidad temprana en las hijas, evidenciada por un menor número de gestaciones. Esto se asoció con una reducción de la reserva ovárica, caracterizada por una menor cantidad de ovocitos totales y folículos primordiales. La exposición prenatal a BP3, BPA o su mezcla inhibió la ovulación en respuesta a gonadotrofinas específicamente en la descendencia de la segunda gestación, sin afectar a la primera camada. El análisis proteómico reveló un colapso metabólico ovárico, con fallas en la β-oxidación mitocondrial y la proteostasis. Los sistemas de cultivo de folículos aislados mostraron que BP3 y BPA inhiben directamente la ovulación a concentraciones relevantes para la exposición humana. Este efecto se vinculó con un menor crecimiento folicular en respuesta a FSH, probablemente por interferencia con el receptor de estrógenos beta. En conclusión, ambos compuestos comprometen la fertilidad femenina mediante mecanismos exacerbados por la historia reproductiva materna.; Exposure to endocrine disruptors (EDs), such as the UV filter benzophenone-3 (BP3) and bisphenol A (BPA), is ubiquitous because of their presence in everyday consumer products and represents a threat to female reproductive health. This thesis evaluated the impact of relevant doses of BP3, BPA, and their mixture during critical developmental periods on long-term reproductive capacity. In vivo models of prenatal and perinatal exposure were integrated with proteomic analyses and in vitro ovulation models using isolated follicle culture, while considering multiparity as a factor of differential susceptibility. Perinatal dermal exposure to BP3 did not alter maternal gestational parameters but caused early subfertility in female offspring, as evidenced by fewer pregnancies. This was associated with a reduction in the ovarian reserve, characterized by lower numbers of total oocytes and primordial follicles. Prenatal exposure to BP3, BPA, or their mixture inhibited ovulation in response to gonadotropins specifically in offspring from the second pregnancy, without affecting the first litter. Proteomic analysis revealed ovarian metabolic collapse, with impairments in mitochondrial β-oxidation and proteostasis. Isolated follicle culture systems showed that BP3 and BPA directly inhibit ovulation at concentrations relevant to human exposure. This effect was associated with reduced follicular growth in response to FSH, probably through interference with estrogen receptor beta. In conclusion, both compounds compromise female fertility through mechanisms exacerbated by maternal reproductive history. Fil: Galliani, Valentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. 2026-07-02T00:00:00Z https://hdl.handle.net/11185/8946 Estudio de la dilatación del cérvix uterino en el parto. Regulación endócrina de las modificaciones del colágeno y la infiltración de leucocitos en el cérvix uterino de rata y oveja Ramos, Jorge Guillermo El cérvix uterino actúa durante la gestación como una barrera anatómica y fisiológica entre el medio externo y el intrauterino, función que se revierte durante el parto mediante un proceso de remodelación que permite su dilatación. Este proceso involucra modificaciones en la matriz extracelular, especialmente en el colágeno y los proteoglicanos, así como infiltración leucocitaria y aumento del contenido de agua del órgano. Los objetivos de esta tesis fueron establecer la asociación entre la infiltración de eosinófilos y la degradación del colágeno durante el parto en la rata; determinar la participación del estradiol (E2), la progesterona (Pg) y la relaxina (Rlx) en la regulación de la infiltración leucocitaria y la remodelación del colágeno; e investigar si estos fenómenos también ocurren en el cérvix de la oveja. Se utilizaron ratas Wistar y ovejas Corriedale, aplicando distintos modelos experimentales para evaluar el efecto hormonal sobre la infiltración celular y la colagenólisis. Los resultados demostraron que, en la rata, la infiltración de eosinófilos y la colagenólisis son fenómenos sincrónicos, pero regulados por mecanismos hormonales diferentes: el E2 promueve la infiltración de eosinófilos, la Pg la inhibe y la Rlx promueve principalmente la degradación del colágeno. En la oveja, el parto se asoció con intensa infiltración de neutrófilos y extensa colagenólisis, ausentes en los animales no preñados. Se concluye que la infiltración leucocitaria y la remodelación del colágeno constituyen procesos independientes, regulados diferencialmente por hormonas específicas durante el parto.; The uterine cervix acts during pregnancy as an anatomical and physiological barrier between the external environment and the intrauterine environment. During parturition, this function is reversed through a remodeling process that allows cervical dilation. This process involves modifications of the extracellular matrix, particularly collagen and proteoglycans, as well as leukocyte infiltration and an increase in the water content of the cervical tissue. The objectives of this thesis were to determine the association between eosinophil infiltration and collagen degradation during parturition in the rat; to establish the role of estradiol (E2), progesterone (Pg), and relaxin (Rlx) in the regulation of leukocyte infiltration and collagen remodeling; and to investigate whether these phenomena also occur in the ovine cervix. Wistar rats and Corriedale sheep were used, applying different experimental models to evaluate the hormonal effects on cellular infiltration and collagen degradation. The results demonstrated that, in the rat, eosinophil infiltration and collagen degradation are synchronous events but are regulated by different hormonal mechanisms: E2 promotes eosinophil infiltration, Pg inhibits it, and Rlx primarily promotes collagen degradation. In sheep, parturition was associated with intense neutrophil infiltration and extensive collagen degradation, both of which were absent in non-pregnant animals. In conclusion, leukocyte infiltration and collagen remodeling are independent processes that are differentially regulated by specific hormones during parturition. Fil: Ramos, Jorge Guillermo. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. 2001-03-23T00:00:00Z https://hdl.handle.net/11185/8938 Caracterización de Halomonas titanicae KHS3 como potencial productora de compuestos de reserva de interés biotecnológico Rodríguez, Ailén Natalí Halomonas titanicae KHS3 es una bacteria ambiental de interés biotecnológico debido a su halotolerancia, su capacidad para sintetizar compuestos de reserva y su habilidad para metabolizar compuestos xenobióticos. Esta tesis se enfocó en identificar los genes involucrados en el metabolismo de los polihidroxialcanoatos, caracterizar la producción de poli(3-hidroxibutirato) (PHB) y desarrollar estrategias para optimizar dicha producción utilizando diversas fuentes de carbono. El análisis de la secuencia genómica permitió identificar once genes asociados a la biosíntesis, regulación y degradación de PHB. Posteriormente, se caracterizó fisiológicamente la cepa mediante ensayos de crecimiento y acumulación de PHB en diferentes fuentes de carbono. El polímero fue identificado y caracterizado mediante resonancia magnética nuclear y técnicas fisicoquímicas. Asimismo, se validó la producción de PHB por la cepa en cultivos batch no estériles y se escaló el proceso de 2 a 12 l, confirmando su potencial como plataforma biotecnológica. El rol del gen phaC1 se evaluó mediante la generación de una mutante por interrupción (SF18) y su caracterización fisiológica, demostrando que este gen es el principal responsable de la acumulación de PHB en las condiciones evaluadas. Finalmente, mediante diseño experimental estadístico se optimizó un proceso de producción en dos etapas que permitió evaluar el uso de fuentes de carbono residuales y la producción del copolímero poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato) (PHBV). En conjunto, este trabajo contribuye a comprender y mejorar la producción de PHB y PHBV en Halomonas titanicae KHS3, fortaleciendo su potencial como plataforma biotecnológica.; Halomonas titanicae KHS3 is an environmental bacterium of biotechnological interest because of its halotolerance, its ability to synthesize storage compounds, and its capacity to metabolize xenobiotic compounds. This thesis focused on identifying the genes involved in polyhydroxyalkanoate metabolism, characterizing poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) production, and developing strategies to optimize its production using different carbon sources. Genome sequence analysis identified eleven genes involved in PHB biosynthesis, regulation, and degradation. Subsequently, the strain was characterized through growth and PHB accumulation assays using different carbon sources. The polymer was identified and characterized by nuclear magnetic resonance and physicochemical analyses. In addition, PHB production by the strain was validated in non-sterile batch cultures, and the process was successfully scaled up from 2 to 12 L, confirming its potential as a biotechnological platform. The role of the phaC1 gene was evaluated by generating an insertion mutant (SF18) and characterizing it physiologically, demonstrating that this gene is primarily responsible for PHB accumulation under the conditions evaluated. Finally, a two-stage production process was optimized using statistical experimental design, which allowed the evaluation of residual carbon sources and the production of the copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) (PHBV). All this work contributes to a better understanding and improvement of PHB and PHBV production in Halomonas titanicae KHS3, further supporting its potential as a biotechnological platform. Fil: Rodríguez, Ailén Natalí. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. 2026-03-25T00:00:00Z