Obtención de un reactivo de inmunoaglutinación para el diagnóstico de la infección por Trypanosoma cruzi

Abstract

La enfermedad de Chagas es reconocida como la principal endemia de América Latina, afectando a aproximadamente a 2 millones de personas sólo en Argentina. El diagnóstico serológico, tiene su origen en Argentina en 1913, desde entonces el avance ha sido enorme. En la actualidad, los látex poliméricos son aplicados en “tests de aglutinación”, que permiten detectar pequeñas concentraciones de antígenos o anticuerpos en diferentes fluidos biológicos. Esta Tesis trata la producción de partículas de látex sensibilizadas con proteínas antigénicas del T. cruzi, de manera que puedan actuar como reactivo de inmunodiagnóstico para detectar la Enfermedad de Chagas. Se sintetizaron y caracterizaron partículas “core-shell” mediante copolimerización en emulsión de estireno y ácido metacrílico; y de estireno y acroleína dietil acetal sobre una siembra monodispersa de poliestireno. Se sintetizaron además, proteínas antigénicas del T. cruzi a partir de la tecnología del ADN recombinante, y se las utilizó para la sensibilización de las partículas de látex. Se estudió la adsorción física de las distintas proteínas a diferentes pH sobre partículas de poliestireno y posteriormente la unión covalente de las mismas sobre la superficie de las partículas funcionalizadas. Finalmente, se aplicaron los distintos complejos látex-proteína en ensayos de inmunoaglutinación. Se utilizaron sueros controles para determinar las condiciones que permitan la mayor diferenciación entre un suero positivo y un suero negativo. Posteriormente, los complejos se enfrentaron a un panel de sueros con el objeto de analizar la sensibilidad y especificidad del ensayo. La reacción de inmunoaglutinación se siguió por turbidimetria.

Chagas disease is recognized as the main endemic in Latin America, affecting approximately two million people only in Argentina. Serological diagnosis has its origins in Argentina in 1913; since then progress has been enormous. At present, polymer latexes are applied in agglutination tests, to detect low concentrations of antigens or antibodies in biological fluids. This thesis addresses the production of latex particles sensitized with antigenic proteins of T. cruzi, to produce an immunodiagnostic reagent for detecting the Chagas disease. Core-shell latex particles were synthesized by emulsion copolymerization of styrene and methacrylic acid (or styrene and acrolein diethyl acetal) onto a monodisperse polystyrene seed. Antigenic proteins of T. cruzi were synthesized from recombinant DNA technology, and then employed for the sensitization of latex particles. First, the physical adsorption of different antigenic proteins (at different pH values) onto polystyrene particles was considered. Then, the covalent coupling of such proteins to the functional groups present on the particle surface of carboxylated and acetal particles was investigated. Finally, the produced latex-protein complexes were applied in inmunoaglutinación tests. To this effect, control sera were used to determine the conditions that allow the discrimination between a positive serum and negative one. Finally, complexes were proved with a panel of sera in order to test the sensitivity and specificity of the test. The immunoagglutination reaction was monitored by turbidimetry.